수정란동결보존은 수정란을 초저온에서 유지함으로써 반영구적으로 보존이 가능한 기술로서 최근에 많은 동물실험실에서 수정란을 동결보존하고 있다. 이는 동물을 유지하는데 드는 비용의 절감효과와 감염, 질병, 번식률감소, 천재지변등의 위험에 대비하여 마우스 line을 안전하게 보호하기 위함에 그 목적이 있다.
Slow Freezing
ㆍ 배란유도한 마우스(교배후 2일지난)의 난관으로부터 수정란을 채취한다.
ㆍ 채취한 수정란을 M2 media로 washing후 CO2 incubator에 둔다.
ㆍ Freezing machine을 미리 차갑게 해두고 동결배지를 만든다.
ㆍ 1straw에 수정란 20~30개가 들어가게 준비하고 dish에 straw 개수만큼 M2 media를 100ul씩 분주해둔다.
ㆍ 수정란을 꺼내 20~30개씩 M2 drop에 넣고 2M DMSO 50ul를 넣고 2분간 둔다.
ㆍ 2분이 지난후 2M DMSO를 50ul 넣고 10분간 둔다.
ㆍ 미리 준비한 straw로 수정란을 옮긴 후 동결기계에 넣고 동결을 시작한다.
ㆍ 동결온도는 0℃~-50℃ : 0.5℃/min, -50℃~-70℃ : 1℃/min 로 한다.
ㆍ 동결이 끝나면 straw를 액체질소탱크로 옮겨준다.