ㆍ색소 도포법: 피모에 색소를 칠해서 구별하는 방법. 머리, 등, 허리, 대퇴부, 다리 등을 조합하여 사용.
picric acid(황색), fuchsin(적색), methylene blue(청색)
ㆍEar punch법: 귀에 구멍을 뚫어서 식별하는 방법, 1~99까지 식별 가능. 마우스, 랫드, 햄스터, 기니픽 등에 사용
ㆍ표지판 사용: 번호가 찍혀있는 알루미늄 판을 목에 걸어주는 장치. 개, 고양이, 원숭이 등에 사용
ㆍ입묵법(入墨法) : 문신과 같은 것, 종생 식별에 사용
ㆍ기타 : 발가락을 잘라서 구별하는 방법. 어린 산자를 이유 전에 발가락을 잘라 개체표기를 하여 유전자 검사를 통해 불필요한
개체를 조기에 분리 도태함으로서 효과적인 동물실 운영을 할 수 있다.
* 표기법은 다음과 같다.
※ 주의사항 및 참고사항
1. Toe는 99번까지다.
2. 100번~199번까지는 오른쪽 귀에 가위집을 낸다.
3. 200번~299번까지는 왼쪽 귀에 가위집을 낸다.
4. 300번~299번까지는 양쪽 귀 모두를 가위집을 낸다.
5. Toe를 자를 때는 발톱아래 살점까지 확실하게 잘라줘야 한다.
(발톱만 살짝 자르면 나중에 발톱이 자라서 번호 구분이 가지 않음)
6. Toe를 잘라서 E-tube에 담고 이전과 같은 방법으로 genotyping을 한다. 이때 개체마다 알코올로 잘 소독해 준다.
다른 개체의 혈액이 contamination되면 PCR결과가 틀려질 가능성이 있기 때문이다.
7. DNA가 많이 필요한 경우, mouse tail도 같이 자른다.
체중 측정
체중측정은 각종실험에 있어서 마취제, 시험물질의 투여량을 결정하는 때에 가장 중요한 항목이다.
ㆍ측정상의 주의
체중계는 동물종에 따라 민감도 및 측정범위가 다른 것을 사용한다.
체중은 1일 중에도 시각에 따라 다른데, 특히 사료에 대한 영향이 크다.
마우스, 랫드 등과 같이 사료를 자유 섭취시키는 경우에는 일정시각에 측정하며, 제한급여 또는 매일급여
(토끼, 개, 고양이, 원숭이류)를 시키는 경우에는 급여전 일정 시간에 측정한다.
ㆍ측정순서
체중계를 올려놓는 table을 고정 후 수평을 조절한다. 동물을 올려놓는 용기를 알코올로 소독후 건조시킨 후
체중계의 영점을 조정하고 표준분동을 올려놓은 후 체중계가 정상적으로 작동하는지 확인한다.
측정할 동물을 조용히 올려 체중을 측정하고, 측정 후 용기를 알코올로 소독한다.
사료 및 음수량의 측정
사료 및 음수섭취량의 측정은 동물의 상태를 알기위한 중요한 지표가 된다.
ㆍ측정방법
마우스, 랫드 등과 같이 사료를 자유섭취시키는 경우에는 체중 측정과 동일하게 일정시간에 측정하며, 토끼, 개, 고양이,
원숭이류와 같이 매일급여 또는 제한급여를 시키는 경우에는 급이 전에 잔량을 측정한다
ㆍ측정순서
자유섭취하고 있는 동물에는 급이기에 사료를 넣어 급이기와 합쳐진 총량을 측정하고, 익일(또는 측정일) 같은 방법으로
급이기를 측정하여 전일 급여시의 중량과 차이를 섭취량으로 한다. 한 케이지에 여러 동물을 수용하고 있는 경우 수용동물수
로 총섭취량을 나누어 마리당 섭취량을 구하는 방법도 있으나 이러한 방식은 참고치정도로만 사용된다. 그러나 군의 차이를
보는 목적으로는 편리하다. 사료 섭취량을 측정할 때에는 갉아서 바닥에 떨어진 사료량을 섭취량에서 뺀 나머지 값이 사료
섭취량이 된다. 음수 섭취량의 측정에 대해서도 같은 방법으로 측정한다.
채뇨·채변
뇨의 정상성분의 양적 변화나 이상성분(단백질, 당, 아세톤체, 적혈구, 세균 등)의 출현은 신장질환뿐만 아니고, 다른 각종
질환(간 질환의 빌리루빈 양성, 페닐케톤뇨 증의 페닐케톤체의 검출 등)의 진단에 도움이 되며, 변의 육안적 성상(형상, 경도,
양, 색조 등)이나 이상성분(혈액, 점액, 농즙, 기생충 등)의 검사는 소화기질환이나 기생충질환의 진단에 필수적인 것이다.
ㆍ채뇨
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구분
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설명
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1회 채취법
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소동물에만 실시되는 채취법이다. 소동물은 손으로 보정하는 순간에 배뇨하는
습성이 있기 때문에 스테인리스제의 판 등에 보정한다. 또는 보정 후 하복부
(방광의 위)를 요도구를 향해 천천히 압박하여 채취하며, 랫드에서는 요배부
(후지에 연결된 곳)를 마찰하면서 압박하는 방법도 있다.
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축뇨법(대사 케이지에
의한 채뇨법)
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동물을 대사케이지에 넣은 후 일정시간 내에 배설되는 뇨를 채취한다.
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카테터에 의한 채뇨법
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토끼, 개 등의 중 동물에 실시 가능한 채뇨법으로 방광 내에 저류되어있는 뇨를
카테터를 이용하여 강제적으로 채취한다.
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방광 천자에 의한
채뇨법
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각종동물에 적용이 가능하며, 동물의 해부 시에 개복하여 직접 방광에 주사침을
찔러 주사관으로 흡입하여 채취하는 방법이다. 채취시 혈액 등이 혼입되지 않게
주의 하여야한다.
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ㆍ채변
채변 방법으로는 채변 봉을 항문에 삽입하여, 직접 신선변(직장변)을 채취하는 방법과 대사 케이지내에서 일정시간 자연 배변된
것을 채취하는 방법이 있고, 특수한 경우로 동물을 해부하여 직장을 가위로 구멍을 내어 맹장 내용물을 직접 채취하는(장관 감
염을 조사하는 경우) 방법도 있다.
채혈법
채혈법으로는 다량의 혈액을 얻기 위한 전 채혈법과 동물을 죽이지 않고 소량의 혈액을 채취하는 부분 채혈법이 있다. 실험의
목적이나 필요에 따라 혈액량, 채혈 횟수 등을 고려하여 적절한 채혈법을 선택하는 것이 중요하다.
ㆍ안와정맥총 채혈
마우스, 랫드 등의 소동물에 응용된다. 동물을 보정 후 하안검 내측에 반으로 자른 헤마토크리트관을 삽입하여 내측에 있는 안
와 정맥총을 파열시키면 관을 따라 혈액이 나온다. 채혈 후 탈지면 등으로 출혈부위를 지혈시킨다.
ㆍ미정맥 채혈
마우스, 랫드를 정맥내 투여와 같은 방법으로 보정한다. 미근부로부터 선단을 향하여 알코올 솜으로 잘 닦는다. 마른 탈지면으
로 건조시킨 후 꼬리의 선단으로부터 1/3～1/4의 부위의 좌우 중 한쪽을 면도칼로 자른다. 자름과 동시에 입을 위로하면 혈액이
나온다. 이것을 헤마토크리트관이나 작은 시험관 등으로 채취한다. 채취후 탈지면 또는 반창고 등으로 압박하여 지혈을 한다.
ㆍ후대정맥 채혈
동물을 마취시켜 보정판에 보정 후 개복하여 장관을 우측으로 제쳐놓고 몸의 중앙부에 보이는 지방조직을 탈지면 등을 사용하
여 분리시키면 암적색의 후대정맥이 보인다. 마우스에서는 23～24G의 주사침을 랫드나 기니픽에서는 22G의 주사침을 이용하
여 신정맥의 5~10mm 하방에 주사침을 삽입하여 채취한다.
ㆍ후대동맥 채혈
후대정맥 채혈과 같은 방법으로 고정하여 개복한다. 지방조직을 분리하여 정맥이 보이면 정맥의 좌측 하방을 달리고 있는 백도
색의 복대동맥을 조심해서 주위의 지방조직으로부터 분리한다. 마우스에서는 23～24G 침, 랫드나 기니픽에는 21～22G 침을
장착 한 주사기로 채혈한다. 주사침의 삽입부위는 대동맥이 좌우 장골동맥으로 분리되는 부위이다. 박동에 맞추어 내관을 당기
면 혈액이 유입된다. 랫드나 기니픽 에서는 실리콘 튜브를 연결한 18～19G의 채혈침을 동맥에 삽입하여 유출되는 혈액을 시험
관 등에 받는 방법도 있다. 채혈량은 마우스에서 0.5～1ml, 랫드에서 5～8ml이다.
ㆍ심장 채혈
마우스, 랫드에서는 통상 마취하에 개흉하여 행한다. 동물을 보정판에 고정하여 흉부의 피부를 절개한다. 다음에 검상연골의
양측으로부터 늑골을 절단하여 개흉한다. 흉골의 양측에 큰 정맥이 달리기 때문에 이것을 자르지 않도록 한다. 마우스에서는
24～25G, 랫드에서는 22～23G 침을 부착한 주사관을 사용한다. 주사침을 심장에 꽂고 내관은 당겨 채혈한다. 흉강을 열었을
경우에는 호흡이 불가능하여 질식사하기 때문에 채혈을 신속히 해야 한다. 실험자는 동물의 좌전흉부를 손으로 촉진하여 심장
의 고동을 가장 강하게 느끼는 부분을 찾아 그곳에 주사침을 삽입한다. 심장에 들어가면 주사기를 통하여 심장고동을 느낄 수
있으며, 혈액이 유입되어 온다. 심장에 들어가지 않은 경우에는 주사침을 빼고 처음부터 다시 한다. 흉강 내에서 주사침을
좌우로 움직여서는 안된다.
ㆍ경정맥 채혈
동물을 보정판에 보정하고 전지의 기시부로부터 눈의 하방을 향하여 3cm 정도 피부를 절개한다. 경정맥이 보일때 직접정맥에
찌르지 말고, 주위의 근육을 통하여 주사침을 삽입한다. 혈관의 모양을 보며 주사기의 내관을 당기며 채혈한다.
* 채혈부위와 채혈량
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구분
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채혈부위
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마우스 채혈량 (ml)
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랫드 채혈량 (ml)
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채혈전의 처치
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일부채혈
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미정맥
미동맥
안와정맥총
이개정맥
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0.03 ～ 0.05
0.1 ～ 0.3
0.05 ～ 1.0
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0.3 ～ 0.5
0.5 ～1.0
0.05 ～ 1.0
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전 채혈
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경정맥
경동맥
두부절단
심 장
후대동맥
복대동맥
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0.5 ～ 1.0
0.5 ～ 1.0
0.5 ～ 0.8
0.5 ～ 1.0
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3.0 ～ 5.0
5.0 ～ 10.0
3.0 ～ 5.0
2.0 ～ 4.0
5.0 ～ 8.0
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마취, 수술
마취, 수술
마취(무마취도가능)
마취, 수술
마취, 수술
마취, 수술
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투여법
ㆍ경구투여법
존데를 사용하는 방법
1회 투여량 : 마우스(5～10ml/kg), 랫드(10～20ml/kg)
주의) 주사기를 한번 잡아당겨 공기가 따라 올라오지 않는 것을 확인 후 투여
ㆍ정맥내 투여법
정맥내 투여에 이용되는 정맥
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동물종
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주요정맥
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동물종
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주요정맥
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동물종
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주요정맥
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마우스
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랫드
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미정맥
후지말초 정맥
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햄스타
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후지말초정맥
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토끼
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후이개정맥
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기니픽
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후지말초정맥
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ㆍ복강 내 투여법
동물을 보정하고 동물의 머리가 아래로 향하게 한다. 투여부위는 하복부 정중선의 좌우의 어느 한쪽 부분을
선택하여 주사침을 찌른다. 주사침을 피하에 5mm 정도 찌른 뒤, 주사침을 세워 복강내로 찌른다. 주사기의
내관을 당겨서 혈액이나 황갈색의 액체(장관 내용물) 등이 빨리지 않는 것을 확인한 후 약액을 주입한다.
ㆍ피하 투여법 : 목부위, 등부위, 좌우 복부 등에 주사한다.
ㆍ근육 내 투여법 : 둔부나 대퇴부를 사용
ㆍ피내 투여법
투베클린 반응 등 면역 알레르기 실험에 많이 사용되는 방법.
마우스, 랫드, 햄스터 : 등 쪽 피부, 미근부 / 기니픽, 토끼 : 이개 (耳介) / 원숭이 : 상안검
0.2 ml 정도 투여 가능
ㆍ뇌내 투여법 : 2단 침을 사용함
주사부위 : 마우스, 랫드에서 양 안와 후선을 잇는 선상의 정중선에서 조금 떨어 진 곳
주 입 량 : 마우스 (0.02 ～ 0.03ml), 랫드 (0.05 ～ 0.1ml)
마취법
ㆍ마취제 투여에 의한 전신마취법
1) Sodium pentobarbital : 쥐에 주사용으로 가장 널리 사용
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장점
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단점
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① 흡입 마취보다 단일주사로써 좋은 근육
이완을 일으키고 깊은 수면상태를
일으킨다.
② 복강 주사로 15~60분, 근육 주사로
1.5~2시간 동안 지속이 가능하다.
③ 수면유도 시간은 복강 주사 후 5~20분,
근육주사 후 최소한 30분이다.
④ Ether 마취와 반대로 기관지 분비액이
심하지 않다.
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① 사용량은 체중과 상관관계가 있으며 충분한 마취량은
치사량과 매우 가 깝기 때문에 체중대비 정확한 사용
량을 결정해야 한다. 같은 체중의 쥐 라도 같은 양에
대비하여 반응 차이를 보일 수 있다.
② 비교적 빈약한 의식 상실효과를 보이고, 혈압과 뇌 내
혈류의 감소를 일으킬 수 있다.
③ 심한 호흡 억압이 있을 수 있으므로 필요하다면 황산
아드로핀을 미리 처리하면 다소 경감시킬 수 있다.
④ 수술 후에 소생이 느리다.
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※ 효과적인 마취방법
① 정상적인 마취량에도 불구하고 쥐가 치사할 때가 있으므로 최소 마취량 의 2/3를 주사하고 심마취는
수술대위에서 ether로 흡입마취 하는 것 이 안전하다.
② 쥐가 회복 증상을 보일 때는 처음 사용량의 1/4을 주사하여 마취시간을 연장 시킬 수 있다.
③ 약 4시간까지의 안전한 마취 시간의 연장은 pentobarbital을 위내와 복 강 내에 동시 투여로 가능하다.
2) Avertin (Aldrich Chemical Co.): Rat 및 mouse embryo 이식, 정관절제 수술 및 난소 절제수술에 이용된다.
ㆍ마취제의 기화가스를 흡입하는 방법
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가스종류
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장점
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단점
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Ether
(에테르)
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① 간편하고 경제적이고 사용량이
체중과 관계없다.
② 수면유도 시간은 복강 주사 후
5～20분, 근육주사 후 최소한
30분이다.
③ Ether 마취와 반대로 기관지
분비액이 심하지 않다.
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① 흡입 마취보다 단일 주사로써 좋은 근육 이완을
일으키고 깊은 수면상태 를 일으킨다.
② 복강 주사로 15～16분, 근육주사내로 1.5～2 시간
동안 지속이 가능하다.
③ 수면유도 시간은 복강주사 후 5～20분, 근육주사
후 최소한 30분이다.
④ Ether 마취와 반대로 기관지 분비액이 심하지 않다.
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해부 방법(부검)
부검순서 : 부검의 순서는 상위의 장기부터 차례로 적출을 하며, 잃어버리기 쉬운 작은 장기는 먼저 적출한다.
안락사법
ㆍ탄산가스 흡입법
탄산가스는 공기보다 무겁고, 무색 무취하며, 저렴하다. 기존의 에테르(인화성 강함), 클로르포름(사람에 독성이 있음) 등에
비해 안전성 높다.
ㆍ경추 탈구법
일순간에 경추를 이격시켜 동물이 고통을 못 느끼게 하여 도살 처분하는 방법이며, 마우스 실험에 많이 이용되고 있다.
ㆍ단두법
단두대를 사용하여 동물이 고통을 느끼지 못하게 목을 절단하는 방법으로 랫 드의 실험에서 이용된다
ㆍ마취제 과량투여에 의한 살처분 : pentobarbital sodium
과량의 마취제를 이용하여 동물이 고통을 느끼지 못하도록 안락사시키는 방 법이다
